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怎么選擇得心應手的Elisa試劑盒
Elisa試劑盒在實驗室已經相當普及,絕大多數ELISA試劑盒都是用于檢測未知樣本中抗原的濃度。用試劑盒當然比自己慢慢摸條件快得多,ELISA試劑盒不僅可以讓實驗更便利,往往還更加?,F在市面上的ELISA試劑盒既有國產也有進口,數量繁多令人目不暇接,怎樣才能選出zui適用的產品呢,首先當然得根據我們所要檢測的分子進行檢測,除此以外也還有一些需要加以考量的因素。
*步、明確檢測何種蛋白。
第二步、明確編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性。
第三步、尋找檢測這些物種蛋白的試劑盒。
第四步、咨詢商家ELISA是試劑盒使用的抗體類型:多抗還是單抗,單抗是針對什么抗原決定簇的。
第五步、做出自己的判斷該買哪個試劑盒。
從Elisa試劑盒的靈敏度、特異性、精密度、準確度、簡便性、安全性及經濟性全面評價:
靈敏度:①為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力;②為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力;
特異性:常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應,使測定結果升高,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標;
精密度:ELISA試劑一般指其批內CV%,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍;
準確度:通過添加回收實驗進行評價;
簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,實驗和測定步驟越少越好,在定性實驗中結果判斷簡單明了,定量試驗結果計算也應簡單;
安全性:指試劑對操作者和環境安全無害無傳染性;
經濟性:試劑在同等質量條件下通過大規?;蚣夹g進步降低成本,而市場價格比較合理;
試劑評價:需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。
根據實驗類型、抗體類型、交叉反應、檢測方式來選擇Elisa試劑盒:
通常人們使用雙抗夾心法進行ELISA實驗,雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是*選擇,例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著,又或者抗體只有一個抗體結合位點。在上述情況下,競爭性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標記的純化抗原與樣本中無標記的抗原進行競爭,以結合捕獲抗體。